Как да се измери каталаза Концентрации

Catalase е биологично ( органично) катализатор. Този ензим е един от най-мощните известни катализатори и има благоприятен ефект върху човешкото тяло и е от решаващо значение за живота . Catalase действа като катализатор за ускоряване на разграждането на водородния прекис . Водороден пероксид е метаболитен страничен продукт , който е отровен на клетките , ако не са отстранени . Catalase помага за разграждането на водородния прекис във вода и кислород. Каталаза също помага в окисляване други токсини като феноли , мравчена киселина , формалдехид и алкохоли . Нещата ще трябва
Two 110 мл хромогенната във фосфатен буфер
300 мкл субстрат - 30% водороден пероксид
400 μL.HRP - хрян пероксидаза във фосфатен буфер
60 мл фосфат буфер
проба от 250 мл разредител сърфактант във фосфатен буфер
Two 30 мл субстрат разредител фосфатен буфер
Two 30 мл спирка реагент - натриев азид
Два флакона 160 U /флакон стандарт каталаза
Spectrophotometer <Бразилски> 10 мкл регулируеми пипети
1 cm пътека дължина спектрофотометрични кювети
1,5 мл полипропиленови микротръби с капачка
епруветки - 12x75 mm (2.5 мл всеки)
Timer
дейонизирана вода <Бразилски>
Показване повече инструкции

1

Подгответе запаса от каталаза , че ще бъде измерване чрез добавяне на 200 микролитра ( ul) на дейонизирана вода, за да концентрациите каталаза в 50 милилитър ( мл ) флакони . Нивото на концентрация на catalese трябва да бъде 160 единици на милилитър ( U /мл) .

2

Добавете 30 микролитра от разреден каталаза в епруветки . Добавят се 500 мкл от субстрат ( водороден прекис - 10 милиметър Н2О2) във всяка епруветка . Бъдете внимателни, да не се пръска на водороден прекис , когато се работи с него.


3

Инкубирайте всяка отделна тръба за една минута при стайна температура.

4

Добави 500 &MU; L на реагент към всеки флакон . Затворете всеки флакон и разбъркайте чрез обръщане на флакона нагоре и надолу. Не въртете смес , разклатете флакона или да го бъркайте с даден обект.

5

Добавете 20 микролитра от всяка реакция смес в епруветките . Добавя се 2 милилитра от реактива HRP във всяка епруветка . Отново разбъркайте разтвора чрез обръщане на епруветките няколко пъти .

6

Инкубирайте разтвора отново , този път в продължение на 10 минути при стайна температура.

7

Отчетете абсорбцията ниво на разтвора със спектрофотометър . Мерките спектрофотометър дължината на светлинните вълни , за да се определи точно кои вещества са налице и и какви концентрации. Този метод ще осигури точно отчитане на концентрациите каталаза . Информацията е полезен в контекста на взаимодействието на каталаза с водороден пероксид , както в този експеримент , и като се извършва по естествен начин в човешкото тяло .