Можете ли да използвате серум за извършване на Western blot?
Въпреки че е възможно да се използва серум за извършване на Western blot, обикновено не се препоръчва. Серумът е сложна смес, която съдържа клетки и протеини, включително тези, които могат да попречат на откриването на специфични протеини, представляващи интерес. Освен това серумът може да има висок фонов сигнал, което може да затрудни откриването на протеини с ниско съдържание. Поради тези причини пречистените протеинови проби обикновено се използват в Western blots.
Въпреки това, в определени случаи може да е необходимо или полезно да се използва серум за Western blotting. Например, ако представляващият интерес протеин присъства в малко количество в пречистената протеинова проба, използването на серум може да увеличи шанса за откриване на протеина. Освен това серумът може да се използва за изследване на протеин-протеинови взаимодействия или за откриване на антитела срещу специфични протеини.
Ако трябва да се използва серум за Western blotting, важно е да се предприемат стъпки за минимизиране на потенциала за смущения и фонов сигнал. Тези стъпки може да включват:
* Подготовка на серумната проба чрез центрофугиране за отстраняване на клетъчни остатъци и неразтворими частици.
* Разреждане на серумната проба за намаляване на концентрацията на смущаващи вещества.
* Използване на блокиращ агент, като говежди серумен албумин (BSA), за минимизиране на неспецифичните взаимодействия.
* Оптимизиране на условията на Western blotting, като концентрации на антитела и времена на инкубация, за намаляване на фоновия сигнал.
Като цяло, докато използването на серум за Western blotting обикновено не се препоръчва поради възможността за смущения и фонов сигнал, то може да е необходимо или полезно в определени случаи. Внимателното оптимизиране на условията на Western blotting е от съществено значение при използване на серум.
