Molecular Cloning протоколи

Molecular протоколи включват клониране на процедурите, използвани за определяне , изолиране и възпроизвеждаща ДНК последователност . Традиционни рестрикция и лигиране протоколи клониране инициират ДНК фрагментация с ограничителни ендонуклеази ( ензими , които намаляват ДНК нишки на рестрикционни сайтове ) , ДНК фрагмент лигиране ( ремонт на прекъсвания в ДНК молекули ) , трансфекция ( въвеждането на нуклеинова киселина в клетка, орган ) и избор ( изборът на индивидуалните геноми за репликация ) . Isolation

протоколи за изолиране на ДНК фрагмент , първата стъпка в молекулно клониране, често се включи полимеразна верижна реакция ( PMR ), която използва цикъла на отопление и охлаждане, за да се разширят части от ДНК . За да се достигне размер на цел последователност , други протоколи включват ДНК ултразвук , реакционната ензимно смилане и използването на химически синтезирани олигонуклеотиди . Тези протоколи са различни в зависимост от големината и размера на изолирана ДНК е необходимо. Наем Лигационите

Протоколи за лигиране включва използването на ензим , ДНК лигаза , да се присъединят към ДНК молекули, заедно с ковалентна връзка . Протокол диктува комбиниране на ДНК фрагменти , вектор за клониране , лигиране буфер , ДНК лигаза и стерилизирана вода в микроцентрофужна епруветка и се инкубира една нощ при 4 градуса по Целзий .