QuikChange Mutagenesis протоколи

QuikChange мутагенеза е името на марката на комплект , използван в биотехнологични изследвания за предизвикване на генетична мутация или промяна на ДНК . Agilent Technologies е компанията зад продукта , който се предлага в две версии, QuikChange II и QuikChange Lightning . Двете комплекти съдържат буферен разтвор , на ензим ДНК полимераза , цветен реагенти , ДНК последователности, или праймери , и клетъчни проби . Mutant Strand Synthesis Реакция Протокола

Техници синтезират два олигонуклеотиди или кратко ДНК последователности , съдържащи желаната мутация . След това те се подготвят контролната реакция с ДНК последователности , разтвор дНТФ микс и ДНК -полимераза ензима , добавяйки, дестилирана вода. По-късно , те се подготвят редица примерни реакции при използване на различни концентрации на двойно - верижна ДНК ( двойноверижна ДНК ) , като в същото време грунд или олигонуклеотиди постоянна концентрация , съгласно инструкциите на производителя . Те държат на пробите при 203 градуса F в продължение на 30 секунди. Пробата , съдържаща ДНК сегмент номер две е също изпитва при температура колоездене, техника, където температурните промени през кратки периоди от време. Накрая , пробите се поставят върху лед в продължение на две минути.


Dpn I Храносмилането на Протокола от продукти за допълване

Dpn I ограничение ензим отрязва ДНК на определени места . Един микро - литра на този ензим се добавя директно към всеки усилване реакция под стандарта му слой от минерално масло с помощта на микро - пипета или специализиран върха пипета аерозол - устойчиви . Въпреки това, наслагване минерално масло се изисква само ако термосайклера , апарат , използван за усилване на ДНК сегменти , не разполага с гореща върха събрание. Реакцията е леко смесена и по-късно поставя в микро - центрофуга за една минута . След това пробите се инкубират при 98.6 градуса F в продължение на един час.