Cell- базирани ELISA протокол

ELISA , или ензим - свързан имуносорбентен анализ , се използва като инструмент за диагностика в медицината и в биологични изследвания за количествено определяне на размера на специфичен протеин . ELISA използва антитела за откриване на протеина от интерес и реагент, който произвежда цвят . Количеството на цвета се отнася до количеството на протеин . Cell Култура

Клетките трябва да бъдат поставени в ямките на 96 - и плоча с 100 микро- литра медии растеж и клетките се оставят да престои една нощ . Ако сте изучаване реакция на клетките към фактор , клетките трябва да бъдат серум - глад в продължение на 24 часа и след това се стимулират с фактор под проучване .


Fixation и първично антитяло

След отстраняване на средата , клетките се третират с фиксатор като три% формалдехид , или метанол . Клетъчната мембрана трябва да стане пропусклива за да позволи на антитялото да проникне в клетката . Пропускливост може да бъде постигната чрез използване на 0.1% Triton , ако не е бил използван преди метанол . Неспецифичното свързване могат да бъдат предотвратени при използване на 10 процента фетален телешки серум, разреден в фосфат буфериран физиологичен разтвор . След отстраняване на блока , първичното антитяло може да се прилага и се инкубират в продължение на един час.