Как да спечелим една ограничаването Карта

В ранните дни на молекулярната биология , учените често използваните ограничение картографиране да се разбере гените те изучават . В съвременните изследователски лаборатории , ограничение картографиране е до голяма степен остарели , защото секвениране е станала по- широко и по-икономично , отколкото в миналото . Въпреки това , има случаи, в които рестрикционна карта могат да бъдат подходящи за изследователя да изпълнява своите изследвания . Цялостният подход за ограничаване картографиране включва използването на храносмилателни ензими, за да се съборят физически проба от ДНК. След измерване на продуктите от тази храносмилането, можете да " сглоби " парчетата и извлече оригиналната последователност на ДНК. Нещата ще трябва
ограничителни ензими
Sample ДНК
Буферен разтвор
Ice и гореща водна баня
гел електрофореза оборудване MarketBook.bg: Покажи повече инструкции
ДНК Digestion <Бразилски>
1

Добави ограничение ензим за ДНК проба. Използвайте EcoR1 , често използван ензим , например.

2

Добави тази смес се прибавя буферен разтвор , който по същество е място за реакцията да се случи.


3

повишаване на температурата на реакцията , както е посочено в инструкцията New England Biolabs . Всяка рестрикционен ензим има специфична температура на реакцията , при която функционира най-добре. Освен това , всеки ензим има специфична нуклеотидна последователност, тя е предназначена за насочване . EcoRI ще сканира и се нарязва на ДНК при CAATTC нуклеотидната последователност. Това точната цел на нуклеотиди трябва да съществува за ензима да се обвърже и нарязани на ДНК. До този момент, всички материали трябва да се съхраняват на лед, за да се предотврати нежелано дейност .

4

След като се остави да протече реакцията , както е посочено в ръководството, тече сместа в гел електрофореза машина за разделяне на ДНК фрагменти според размера . Най-малките фрагменти ще се движат най-отдалечената през гела.

5

Измерете разстоянието , изминато от всеки ДНК фрагмент . Тези пет стъпки трябва да бъдат повторени с множество различни ензими отделно.


Изграждане на картата на ограничаването

6

Използването на данните, получени от гела , да събира цялата информация, която са намерили като се използват различни рестрикционни ензими .

7

извлича от порядъка на сайтовете на ограничение чрез сравняване на различни дължини фрагменти , произведени от всеки ензим. Например , ако ензим # 1, произведени два фрагмента с еднаква дължина и ензимни # 2 доведе до три фрагмента с еднаква дължина , може да се заключи, че ензим # 1 съкращения средата на ДНК и ензимни # 2 отрязва ДНК в трети .
<Бразилски> 8

Използване на заключенията, направени в стъпка 2 , да се групират по реда на рестрикционни места за ДНК.