Прилепналите клетки протокол

клетки в култура са или форма култивирани в суспензия , като кръвни клетки , или клетки, такива като фибробласти , изискващи повърхността, върху която могат да се придържат . Някои от повърхностите могат да изискват покритие в различни извънклетъчни матрици в зависимост от типа на клетките и проучване . Всички клетъчни култури изискват да бъдат проведени, асептични условия . Оптимална среда

Повечето клетъчни типове могат да бъдат култивирани в модифицирана среда на Eagle на Dulbecco ( DMEM ) или на Roswell Park Memorial Institute (RPMI ) с добавянето на 10 процента серум от телешки зародиш , 2 milimoles НА ПРАВИТЕЛСТВАТА амино киселина глутамин и антибиотици , например , 100 единици пеницилин и 0.1 милиграма на милилитър стрептомицин . Клетките се поддържат в техните медии в овлажнен инкубатор при 37 градуса по Целзий и 5 на сто въглероден диоксид.


Splitting

Клетките следва да се проверяват ежедневно за инфекция , смърт или растеж . След като колбата с тъканна култура е 80% покритие в клетки , клетките трябва да се разделят , за да се поддържа здравето на клетките и лог-фазата на растеж. Медия се отстранява и клетките се промиват във фосфатно буфериран физиологичен разтвор . Прилепналите клетки изискват добавянето на трипсин и етилендиаминтетраоцетна киселина ( EDTA ) за отстраняване на клетъчни адхезионни протеини . Gentle възбуда трябва да се отстранят клетките . Media трябва да се добави за да се неутрализира разтворът на трипсин /EDTA. Продажба и Наем на рекултивиране

Разредените клетките и tryspin /EDTA разтвор може да се центрофугира, за да се утаят и измиване клетките . Клетките могат да бъдат повторно суспендирани в среда и се разреждат и посяВат в нови колби. Всеки път, когато клетките се разделят броя на пасаж клетки се увеличава с едно .


Media Change

Media трябва да се сменя два пъти седмично чрез премахване на старите медии и заместването му с нова , топла среда .