Клетъчната повърхност Биотинилиране протокол

Биотинилиране използва способността на разтворим витамин биотин се свързва към клетъчните протеини . Биотин се свързва с протеин стрепавидин и , следователно, е полезно в клетъчната биология за визуализиране на клетъчни протеини . Биотинилиране позволява безопасното етикетирането на протеини в сравнение с техники като радиоактивност и не влияе върху нормалната функция на клетката . Това позволява на изследователите да изучават клетъчни протеини, такива като рецептори , и което позволява по-добро разбиране на заболявания и болестни процеси . Етикетиращи суспендирани клетки

Измиване на клетки в ледено - студена фосфатен буферен физиологичен разтвор (PBS ) за отстраняване на замърсители . Буфери , съдържащи трис и глицин ще се конкурират с биотинилиране и трябва да се избягва . За да се избегне биотинилиране вътрешни протеини , етикета може да се извърши при 4 градуса по Целзий или в присъствието на азид . Ресуспендирайте клетките в PBS и разтворим биотин, сулфо - NHS- LC - биотин . Наем Етикетиране прилепнали клетки

Измийте клетки в PBS и се инкубира с продукта, като например сулфо -NHS - LC - биотин . След това клетките се остъргват в чиния и се лизират в буфер , съдържащ детергент Triton X - 100 и подготвени за визуализация.