Как да се измери Cell жизнеспособност

В повечето биологични експерименти, включващи клетъчна култура , критична стъпка включва знаейки кои клетки са живи и кои са мъртви във вашата проба. Боядисват изключване е най-популярният метод за измерване на клетъчната жизнеспособност . Бои изключване се основава на теорията, че живи клетки съдържат непокътнати мембрани и мъртви клетки не , така мъртви клетки абсорбират боята в цитоплазмата . Има различни бои и протоколи, както и методите , които избирате, трябва да се основават на разходите , чувствителност , удобство и продължителност на процедурата . Trypan синьо е обща багрило се използва за измерване на клетъчната жизнеспособност , тъй като процедурата може да бъде направено в пет до 10 минути и струва само количеството на реагента на боя . Нещата ще трябва
0.4% трипан синьо реагент
Хемацитометърът
Cover приплъзване
пипета
пипета съвети
фосфатен буферен физиологичен разтвор (PBS )
Light микроскоп
<Бразилски> Покажи повече инструкции
е. 1

Снабдете се с пелети на клетките сте измерване .

2

Ресуспендирайте клетъчната пелета в PBS , за да получите около 5 х 105 клетки /мл . PBS се използва, защото жизнеспособност измервания са по-точни , когато клетките са в среда свободна от серум; серумните протеини също могат да се оцветяват и ви дават подвеждащи резултати .


3

Добави равни части от клетъчна суспензия в PBS към равни части от 0.4% трипан синя боя , за да се получи 1 до 2 разреждане ( например : . 100 ул. на клетки до 100 на ул. трипан синьо ) и разбъркайте чрез поставяне нагоре и надолу

4

Инкубирайте смес за по-малко от три минути при стайна температура. Ако клетките са преброени след около пет минути , жизнеспособност ще бъде неточна поради клетъчна смърт .

5

с капака да мине вече на място , попълнете всяка страна на хематоцитометър брояч с клетъчната суспензия . Обикновено , всяка страна ще вземе 10 до 20 ул .

6

Поставете хемацитометърът на сцената на светлинен микроскоп и се съсредоточи върху клетките .

7

Всяка страна на хемацитометърът съдържа множество квадрати . Преброяване на общия брой на клетките в един квадрат от хемацитометърът . След преброяване на броя на нежизнеспособни (в синьо) и жизнеспособни ( прозрачно) клетки отделно , в същия площад .

8

Изчислява се процентът на жизнеспособните клетки в квадрата , като се раздели на броя на жизнеспособните клетки на броя на общите клетки и се умножи по 100. Правете това в продължение на няколко квадратчета на хемацитометърът да се получи средно измерване на жизнеспособността .