Отстраняване на гел електрофореза
полиакриламидна гел електрофореза , или PAGE , е техника, обикновено се използва за разделяне на органични молекули в биологична проба . Молекули с по-нисък размер и тегло мигрират по-бързо на полиакриламиден гел , когато се прилага електрически ток . Ясно обособени ленти обикновено са наблюдавани след завършен Гелът се инкубират в частност петно . Това е относително прост метод . Въпреки това , липсата на ленти или ивици , които намазка или нечистите може да има проблем в един или повече етапи на метода. Трябва да следвате основните насоки за отстраняване метод гел електрофореза , когато резултатите не са , както се очаква . Нещата ще трябвастепен на качество бис : акриламид или сглобяеми плочи
две стъклени плочи
Акриламид : Bis
TBE Buffer ( TRIS , борна киселина, EDTA)
Захранване
Upper буфер камера
Долна буфер камера
Protein на ДНК проба
TEMED
амониев персулфат
Gel петно на MarketBook.bg Покажи повече инструкции
е. 1
Започнете с последната стъпка на гел електрофореза първата и работи назад . За гел електрофореза , последната стъпка е процедурата за оцветяване използва да наблюдават примерни ленти. Малко проблеми трябва действително да се появят по време на процедурата за оцветяване. Въпреки това , трябва да бъде под формата на прах петна и разтворени в подходящ буфер , преди да се използват за оцветяване на гел . Уверете се използва правилната концентрация на петна.
2
Проверете захранването. Липсата на ленти може да се посочи на ток или напрежение настройката е твърде висока и тестовите проби са мигрирали извън гела. Високите настройките също могат да причинят примерни компоненти да мигрират през гела твърде бързо , което води до лошо резолюция и банди , които се появяват нечисто. Пробите не могат да мигрират през гела , ако настройката за захранване е ниска. Пробите могат да се носят от кладенеца , където те са били натоварени и не мигрират през гела.
3
Проверете течността акриламид използва за да хвърли полиакриламидния гела. Обикновено , процентът на акриламид използва да хвърля полиакриламид гел варира от 5 до 15 на сто. Пробите се състоят от по-големи молекули са натоварени на 5 процента гел защото големите фрагменти се движат по-бавно на гелове с по-висок процент акриламид . Малки молекули са заредени по -висок процент гел поради ниска концентрация гел не ще бъде в състояние да разреши малки проби .
4
Проверете използвани да полимеризира акриламид реагенти . Полиакриламиден гел се образува чрез полимеризация на течна смес , състояща се от бисакриламид и акриламид . Амониев персулфат и TEMED се добавят към акриламид да катализира образуването на гел . Обикновено , акриламид трябва да покаже признаци на полимеризация ( образуване на гел ) 15 минути след са били добавени амониев персулфат и TEMED . Полимеризация , която се проявява твърде бързо е резултат на големи количества амониев персулфат . Твърде малко амониев персулфат може да доведе до непълна или неравномерно полимеризация.
5
Потвърдете количеството на пробите да зареждат . Високите концентрации на проби могат да се движат бавно през гела и намаляване резолюция банда. Концентрация на проба, която е ниско не може да се наблюдава след гела е оцветен . Тези петна имат ограничения по отношение на минималния размер на проба, която може да бъде заснета в резултат на петно чувствителност.
6
качество Confirm на пробите заредени . Соли и други замърсители , присъстващи в пробата може да повлияе на движение на пробата по гела. Електрофорезата е резултат на електрически ток , преминаващ през гел, който съдържа електропроводими буфер; високи солеви концентрации в пробата може да повлияе на движение на този ток през гел . Изолиране на проба Вашият трябва да включва комплект за пречистване , която ще произвежда относително чиста проба.
7
преглед на литературата или на писмен протокол , за да се определи дали правилното СТРАНИЦАТА се използва за провеждане на експеримента. Процентът на акриламид в PAGE е специфичен за размера на пробата, която се тества . В литературата също може да предостави конкретна информация по отношение на създадени на доставката , а коефициентът на проба миграция власт.
