Протоколи за Hoechst оцветяване

Петната Hoechst са флуоресцентни бои , използвани за етикетиране на ДНК и РНК чрез флуоресцентна микроскопия и флоуцитометрия техники. Hoechst 33258 и Hoechst 33342 са най- често използваните на тези петна. Те имат способността да се свързват към ДНК молекули , което води до ядрата и митохондриите се показват флуоресцентен под ултравиолетова светлина . Протоколи за Hoechst оцветяване са обичайна практика в биотехнологични и генетични лаборатории и включват клетъчното оцветяване техники , използващи както Hoechst 33258 и Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC оцветяване и Stem Cell Пречистване протокол

Този протокол се използва за оцветяване на клетки от мишки, костен мозък . Техници подготвят проба на костен мозък с разтвор на HBSS + сол , HEPES буфер и фетален телешки серум. Те се върти разтвора и добавете към предварително затоплен DMEM среда. След това се прибавя Hoechst петно ​​. Разтворът се поставя в 98,6 градуса по Фаренхайт водна баня в продължение на точно 90 минута , съобщава на Департамента по имунология в университета в Питсбърг. ДНК сегменти изглеждат оцветени в флуоресциращо под цитометър .


Hoechst 33342 ДНК оцветяване

През този протокол , техници окачени Hoechst 33342 петно ​​в дестилирана вода, добавят се 2% фетален телешки серум , за да на клетъчна проба , поддържане на рН 7,2 с помощта на буферен разтвор . След това клетките се инкубират при 98.6 градуса F за един час , и веднага анализирани с парче на оборудване , наречено цитометър .

Мръсна ДНК е след това видимо и флуоресцентни, според Университета на Мичиган здравна система .
<Бразилски>

ДНК Detection използване на ДНК -свързващ Fluorochrome Hoechst 33258

Това протоколи, използвани част от оборудването , наречен спектрофотометър , за да анализират ДНК и РНК сегменти. Техници използват Hoechst 33258 работен разтвор и телешки тимус ДНК проби . Те също така да направи отделен разтвор с помощта на ДНК пробата и химикал, наречен етидиев бромид. По-късно , те сравняват резултатите от клетъчното оцветяване и в двете медии , с помощта на спектрофотометър , според Настоящи протоколи в Cytometry .