Вътреклетъчно оцветяване протокол за поточна цитометрия

поточна цитометрия е инструмент, който е полезен в изследването на клетъчни протеини . Тя използва излъчване на светлина или флуоресценция от протеини в клетката . Антителата или сонди , маркирани с флуоресценция се използват за проучване на специфични протеини . Флоуцитометрия се използва за диагностика на редица заболявания , включително рак , но е полезно за медицински изследвания също . Крепежни Cells

Клетките следва да бъдат определени , за да се поддържа стабилността на вътреклетъчните протеини. Редица фиксатори може да се използва като формалдехид или ледено студен ацетон . След фиксация, клетъчната мембрана трябва да бъде permealized да позволи на антитялото да влезе в клетката . Детергенти като Triton или NP -40, или ледено студен метанол могат да бъдат използвани, за да направят дупки в клетъчната мембрана . Наем Оцветяващи

Измийте клетки в блокиращ буфер 0.5% говежди серумен албумин разрежда в фосфат буфериран физиологичен разтвор , BSA /PBS . Клетките се инкубират в блокиращ буфер за намаляване на неспецифично свързване . Добави първично антитяло се разрежда в блокиращ буфер и се инкубират при стайна температура , за оптимизиран период от време . Измийте с блокиращ буфер .