Лизис на клетките протокол за изолиране на протеин

Малки протеини могат да бъдат получени синтетично , но за много причини има не синтетичен машини по-добре от самата клетка . Обикновено първата стъпка в изолация протеин е клетъчен лизис . Cell Lysis

В клетъчно лизиране , мембраната около разкъсвания клетки.

Думата " лизис " идва от гръцки корен и означава " да се отпуснеш . " В клетъчно лизиране , силите , които притежават клетъчната мембрана заедно са прекъснати , което го кара да се спука . Съдържанието на клетката след това се освобождават в околната разтвор , включително протеин от интерес . Обикновено това се прави чрез добавяне на химически разтвор , наречен лизис буфер .


Подготовка лизисен буфер
е. Изборът на лизис буфер ще зависи от клетъчния тип , протеина и прилагането .

безброй различни лизиращи разтвори са търговски достъпни , или общи рецепти може да бъдат използвани за получаване лизис буфер от общите химикали . Най-добрият буфер да се използва , варира в зависимост от вида клетка използва , протеинът да се изолира и крайното приложение , но като цяло , лизиращ разтвор съдържа детергент молекула ( често NP- 40 или Triton - X ) , което се разтваря в клетката мембрана , заедно с буфери , хелатори и протеазни инхибитори за предотвратяване на протеин от повреждане веднъж освободени от защитната среда на клетката . Продажба и Наем лизис Условия

Извършване лизис под ледените условия предотвратява повреда на протеина от интерес .

лизисен буфер обикновено се използва лед - студена , и процеса на лизиране се оставя да протече при студени условия . Разтворът внимателно се разклати за насърчаване на равномерно разпръскване на клетките и лизис продукти. След около 5 до 10 минути , лизиращият разтвор е обикновено неутрализира да предотврати по-нататъшно действие. Тези предпазни мерки намаляват повреда на протеина и да намалят сумата на чужди боклуци произведени , че по-късно ще трябва да бъдат отстранени.


Други лизиране Методи

Механична сила може да се използва за лизиране на клетките.

Въпреки че химичният лизис е благородният и най-често използвани , по-строги механични методи за лизиране на клетки могат да бъдат използвани в някои случаи . Те включват ултразвук , повтарящи се цикли замразяване-размразяване и хомогенизиране , който е процес на майшуване . Консултирайте се с техническа литература , за да намерите най-подходящия метод за вашия конкретен случай .