Размножаване на рекомбинантни плазмиди

Намерено в някои бактерии и дрожди видове, плазмиди са сравнително малки , самовъзпроизвеждащи пръстени на ДНК , разположени извън основната хромозома на клетките . Те са много полезни в генното инженерство , тъй като е относително лесно за снаждане избрани гени от други видове в плазмиди , ги прехвърля между клетки гостоприемници от същите или различни видове , и стимулиране на тях да се реплицира - или разпространяват - в много по-висока от - нормални - или усилват - цени. Рекомбинантните плазмиди са само тези, които са проектирани да съдържат гени от други видове . Особено с усилен размножаване , рекомбинантни плазмиди могат по- бързо и лесно се изразяват желаните протеини в голям , промишлен мащаб . Нещата ще трябва
съществуващо плазмид и генни библиотеки, или плазмиди и гени , които сами сте изолирани от техните организми гостоприемници и се съединяват заедно
оборудване Cell култура
Усилване средство (а ), като например калциев хлорид , токов удар , студ и горещина , хлорамфеникол , токов удар и /или Taq полимераза ензим на MarketBook.bg Покажи повече инструкции
е. 1

Изберете процедурата за усилване или процедури, които най-добре отговарят на вашите специфични рекомбинантен плазмид и домакин организъм . Някои процедури работят по-добре с някои плазмиди и домакини отколкото с другите. Ако работите с нова , все още експериментален рекомбинантен плазмид и /или се опитва на различни видове гостоприемници , може да се наложи да се определи най-добрия процес или процеси усилване чрез опити и грешки .

2

Опитайте процеса нарича трансформация , ако вашите специфични плазмид и домакин клетъчни видове биха могли да отговорят на него. Chill клетките и плазмиди до нула градуса С в разтвор на калциев хлорид ( СаСЬ ) . Бързо повишаване на температурата до 37-43 градуса C. Тази рязка промяна на температурата причинява клетъчните мембрани , за да поемат по-големи количества от плазмид .


3

Изпрати високоволтови импулси на електроенергията през разтвора на плазмиди и клетки, ако е електропорация желания метод усилване . Тази техника увеличава клетъчната мембранна пропускливост на плазмиди .

4

Изложение отгледаната клетка-приемник на ниски нива на антибиотика хлорамфеникол да генерира колкото сто плазмиди на клетка . Този метод потиска репликацията на основните хромозоми на клетки гостоприемници " , докато индуциране неконтролирано репликация на плазмида , включително гена челно в него.

5

Прилагане на полимеразна верижна реакция, или PCR метод за генериране на плазмидни копия на много високи порядъци . PCR се базира на ДНК полимеризация , химична реакция , чрез която генетични последователности са в природата . PCR е най-често се катализира с топлоустойчив ензим, наречен на Taq полимеразата , извлечено от бактериални видове, които живее в горещи извори.