Как мога да се редят на опашка за DNA Analysis

? Agarose гел електрофореза е най-често срещаният метод за визуален анализ на ДНК фрагмент , който позволява на техниците да визуално различим ДНК фрагменти , основаващи се на размер. Агарозен гел поддържа магнитно поле и от ДНК има отрицателен заряд , се движи към положителния края на магнитното поле . Малки ДНК фрагменти се движат по- бързо през гел и по-големи фрагменти се движат по- бавно . ДНК фрагменти се оцветяват с флуоресцентно интеркалираща средство, известно като етидиев бромид . Това дава възможност за сравняване на няколко електрофорезни ДНК проби на гел . Нещата ще трябва
Agarose гел , 0.7 на сто до 2 на сто
Tris - борат -EDTA ( TBA ) , трис - ацетат -EDTA ( TAE ), натриев ацетат литий ( LA ) , борна киселина ( SB ) буфер
Ethidium бромид
Gel товарене боя
Gel тава
електрофореза камерни
Ръкавици
защитни средства за очите
на пипетата,
Електрофорезни гребен в
Покажи повече инструкции <Бразилски> Подготовка 0,7 процента агарозен гел

1

Претеглят се 0,7 грама на агарозен прах и след това се поставя в голям ( 250 мл ) в конична колба .

2

Добави 100ml на 1X ( редовна сила) буфер ( TAE , TBE , SB или LB буфер ) към коничната колба с агарозен праха.


3

Микровълнова или топлинна енергия с помощта на Бунзен горелка за приблизително една минути , докато разтворът се избистри и стане агарозата се разтвори.

4

колбата Махни от източника на топлина и се оставя да се охлади до 55 до 60 градуса по Целзий.

5 <стр.> Добавя се 1 мкл ( микролитра ) на етидиев бромид на агарозен разтвор се охлажда като се използва подходящ размер пипета , обикновено 1 ml . Разбъркайте разтвора да се смесват .

6

Изсипете гела бавно в тавата гел , като се гарантира че няма образуването на мехурчета по време на този процес. Ако няма доставени и язовири с тавата гел , използвайте самозалепваща лента , за да ги формират .

7

Поставете електрофореза гребен внимателно в гела , като се гарантира твърда позиция и в правилната ориентация . Електрофорезни пити може да се различават значително от броя на зъбите , което имат. Оставете гела да настроите за около 25 минути

8

Гелът се потапя в същия буфер , използвано за приготвянето на agaorse решение - . В този случай, 1X буфер. Гелът се потапя в до 5 мл буфер .


Подготовка и Loading на ДНК в агарозен гел за анализ е.
9

Transfer 5 до 10 мкл вашата проба (и) от техните реакционни тръби в сладки тръби. В случай , че искате да използвате цялата реакционна смес , нова епруветка не е необходимо.

10

Добави 0.2Х натоварване буфер за всеки един от вашите свежи епруветки , съдържащи ДНК проба за товарене . <Бразилски>
11

Извадете електрофореза гребена бавно , като се гарантира , че не се прекъсне гела или да създадете всяко пространство между дъното на гела и тавата гел.

12

Добави пет 12 мкл подходящ ДНК маркер на първия и е създадена от електрофореза гребена . Дали ДНК маркер е подходящ или не, зависи от размера на фрагментите , което очакват от вашия проба.

13

Load пет до 10 мкл от вашите проби в оставащите ямки и се добавя равен размер на една и съща ДНК маркер в крайния кладенеца.

14

Поставете електродите в електрофореза камера чрез включване на проводниците в правилните гнезда в камерата и задайте електрода 50 до 150 V. <Бразилски>
15

Оставете гела да се кандидатира за 1-4 часа.


анализ на резултатите на MarketBook.bg 16

Махни гела от камерата гел и го постави било в UV стая за визуална идентификация, или място в една машина, която е в състояние да вземе снимка на гела.

17

Измерете разстоянието маркери на миграцията в техните гнезда.

18

Построява разстоянията срещу размера на лентите върху semilog милиметрова хартия и се направи най-добре съответстващата линия.

19

Изчислете разстоянията на вашите непознати банди .
<Бразилски> 20

изчислите размерите на вашия неизвестни банди , като начертаете линия от разстоянието , изминато от вашите неизвестни банди, които отговаря на линията на най- удобно.

21

Начертайте друга линия от тази среща точка над оста на размер.