N крайно секвениране протокол

Edman разграждане - добре известен метод за определяне на N - терминалната аминокиселина на протеин - изисква разцепване на амино киселина , последвано от идентификация с хроматография или електрофореза . Автоматизираните процеси ускоряват N - крайно подреждане . Фактите

протеини, произведени вътре в отделни клетки действат като хормони , ензими и други важни регулатори. Генетична мутация води до необичайно протеин може да има сериозни последици за здравето .


Метод

N- терминалната аминокиселина се разцепва чрез обработване с един от няколко реагенти , след това се хидролизира за да се образува отделна аминокиселина . Тънкослойна хроматография , HPLC или електрофореза определя размера на амино киселина , и се сравнява с известен стандартен размер . Новият N -края на оставащия протеин може да бъде разцепен по подобен начин за идентификация. Продажба и Наем на автоматизация

Приложни биосистеми довели развитието на автоматизиране Edman деградация, която свързва пречистен протеин на мембрана и третира с фенилизотиоцианат . Свободната аминокиселина автоматично инжектира в HPLC система за идентификация. Наем Усложнения

Протеини трябва да останат относително чисти и свободни от замърсители, за да се определи точно N - крайната аминокиселина . Edman граници деградация изискват големи протеинови молекули, раздробени на малки пептидни вериги вече не са 50 аминокиселини .