Биотинилиране протоколи
Биотинилиране е процесът на свързване на биотин или витамин Н , към протеин или други молекули . Тази научна процедура се използва най-вече в областта на биотехнологиите и молекулярната биология изследвания, включващи ДНК , протеини и антигени , които са молекули на имунната система на организма разпознава като нашественици. Биотинилирането протоколи включват Биотинилирането на антитела и пептиди , както и на клетъчната повърхност Биотинилирането . Биотинилиране на антитела
За да създадете връзка към биотин антитела протеини произвеждат когато антиген влиза в тялото , техници да използват натриев бикарбонат ( NaHC03 ) при рН 9; диметил сулфоксид ( DMSO );
NHS - биотин и физиологичен вещество, наречено PBS . Пробите се смесват с разтвор на натриев бикарбонат , който по-късно се прибавя към NHS - биотин в DMSO. Разтворът след това се добавя към анализирани антитела и се инкубира на част от оборудването нарича ротатор в продължение на четири часа при стайна температура и една нощ при 39.2 градуса по Фаренхайт . Накрая , разтворът се разрежда с PBS .
Клетъчната повърхност Биотинилиране
В биотинилиране протокола на клетъчната повърхност , техници тъканна култура , фосфат - буфериран физиологичен разтвор ( PBS ) в рН 7.4 и сулфосукцинимидил - 2 - ( биотинамидо ) етил - 1 ,3 - dithiopropionate буферен разтвор за балансиране киселинност , съдържащ аминогрупи и TrisCl , съгласно Current Protocols в протеин Science.The клетки се смесват с биотин и буферен разтвор , декантират и центрофугират . Твърди съдържание и специфични протеини са по-късно анализирани върху гел електрофореза плоча .
